Nil-Blau ist ein Schandfleck in der Biologie und Histologie verwendet. Es kann für lebende oder fixierte Zellen verwendet werden, und verleiht eine blaue Farbe, um die Zellkerne.

Sie kann auch in Verbindung mit der Fluoreszenzmikroskopie verwendet, um auf die Anwesenheit von Polyhydroxybutyrat Granulate in prokaryotischen oder eukaryotischen Zellen zu färben. Kochen einer Lösung von Nilblau mit Schwefelsäure produziert Nilrot.

Chemische und physikalische Eigenschaften

Nilblau ein Fluoreszenzfarbstoff ist. Die Fluoreszenz zeigt, insbesondere in unpolaren Lösemitteln mit hoher Quantenausbeute.

Die Absorptions- und Emissionsmaxima von Nilblau sind stark abhängig von pH-Wert und die verwendeten Lösemittel:

Die Dauer der Nile blaue Fluoreszenz in Ethanol wurde als 1,42 ns gemessen. Dies ist kürzer als der entsprechende Wert von Nile rot mit 3,65 ns. Die Fluoreszenzdauer liegt im Bereich von 10 bis 10 mol / L nach Verdünnung unabhängig.

Nil-Blau-Färbung

Nilblau wird zur histologischen Färbung von biologischen Präparaten verwendet. Sie weist auf die Unterscheidung zwischen neutralen Lipiden, die gefärbten rosa und Säuren, die Blau gefärbt sind.

Der Nil-Blau-Färbung, so Kleeberg, verwendet die folgenden Chemikalien:

• Nile Blue A
• 1% Essigsäure
• Glycerin oder Glyceringelatine

Arbeitsablauf

Die Probe oder Gefrierschnitten wird / werden in Formaldehyd fixiert und dann für 20 Minuten in den Nil-Blau-Lösung eingetaucht und mit Wasser gespült. Zur besseren Unterscheidung ist in 1% Essigsäure für 10-20 Minuten getaucht, bis die Farben sind rein. Dies könnte nur 1-2 Minuten dauern. Dann wird die Probe gründlich mit Wasser gespült. Danach wird die angefärbte Probe auf einem Mikroskop-Objektträger gegeben und überschüssiges Wasser entfernt wird. Die Probe kann in Glycerin oder Glycerin Gelatine eingebettet werden.

Ergebnisse

Ungesättigten Glyceride sind rosa, Kernen und Elastine dunkel, Fettsäuren und verschiedenen Fettsubstanzen und Fettmischungen sind lila, blau.

Beispiel: Nachweis von Poly-β-hydroxybutyrat-Granula

Die PHB-Granalien in den Zellen des Pseudomonas solanacearum durch Nilblau A-Färbung sichtbar gemacht werden. Die PHB-Granula in den gefärbte Präparate werden mit einem Epifluoreszenzmikroskop unter Ölimmersion beobachtet, bei einer 1000-fachen Vergrößerung; unter 450 nm Anregungswellenlänge zeigen sie eine starke orangefarbene Fluoreszenz.

Nilblau in DNA-Elektrophorese

Nilblau offenbar auch in einer Vielzahl von kommerziellen DNA-Färbung Formulierungen für DNA-Elektrophorese verwendet wird. Da es UV Durchleuchtung nicht erforderlich, um in einem Agarosegel, wie mit Ethidiumbromid sichtbar gemacht wird, kann es verwendet werden, um DNA zu beobachten, da es getrennt und auch als Farbstoff in Gel-Extraktion von DNA-Fragmenten, ohne Hilfe Schäden durch UV-Bestrahlung.

Nilblau in der Onkologie

Derivate von Nilblau sind potentielle Photosensibilisatoren in der photodynamischen Therapie von malignen Tumoren. Diese Farbstoffe aggregieren in den Tumorzellen, insbesondere in den Lipidmembranen und / oder werden abgetrennt und in subzellulären Organellen eingeengt.

Mit Nilblau Derivat N-Ethyl-Nilblau können normale und prämalignen Gewebe im Tierexperiment durch Fluoreszenzspektroskopie in Fluoreszenz-Bildgebungs unterscheiden. EtNBA zeigt keine phototoxische Wirkungen.

Synthesis

Nilblau und verwandte naphthoxazinium Farbstoffe können durch sauer katalysierte Kondensation von entweder 5--2-Nitrosophenole mit 1-Naphthylamin, 3-Phenolen mit N-alkylierten 4-nitroso-1-naphtylamines oder N, N-Dialkyl-1, hergestellt werden 4-Phenylendiamine mit 4--1,2-Naphthochinone. Alternativ kann das Produkt einer säurekatalysierten Kondensation von 4-Nitroso-N, N-Dialkylanilin mit 2-naphthol (einem Salz der 9-benzophenoxazin-7-ium) in Gegenwart eines Amins oxidiert werden, die Installation einer zweiten Aminosäure Substituenten in 5-Stellung des benzophenoxazinium Systems. Das folgende Schema zeigt die erste dieser vier Ansätze, die zu Nile Blue Perchlorat: